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Western Blot蛋白印迹实验整体解决方案
时间:2021-02-20 15:21:53点击量:2111次
为什么要做Western Blot?


蛋白印迹实验(Western Blot)概念
印迹法(blotting)是指将样品转移到固相载体上,而后利用相应的探测反应来检测样品的一种方法。

1975年,Southern建立了将DNA转移到硝酸纤维素膜(NC膜)上,并利用DNA- RNA杂交检测特定的DNA片段的方法,称为Southern印迹法。

而后人们用类似的方法,对RNA和蛋白质进行印迹分析,对RNA的印迹分析称为Northern印迹法,对单向电泳后的蛋白质分子的印迹分析称为Western印迹法,对双向电泳后蛋白质分子的印迹分析称为Eastern印迹法。



实验原理

利用SDS-PAGE对蛋白质样品进行分离,然后转移到固相载体(例如PVDF膜)上,固相载体以非共价键形式吸附蛋白质,且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。利用蛋白溶液(如5%的BSA或脱脂奶粉溶液)封闭PVDF上剩余的疏水性结合位点,用所要研究的蛋白质的抗体孵育结合目的蛋白,再用适当标记的二抗孵育结合一抗,辅以适当的底物溶液处理PVDF膜,就会产生可见的区带。

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Western-blot流程


样本准备→蛋白定量→电泳分离→转膜→封闭→抗体孵育→检测


1.制胶

常规制胶步骤耗时、耗力、繁琐、费用高、容易漏胶、存在安全隐患等


PAG-100Auto 全自动蛋白凝胶预制系统

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制胶数目:5块/10块,每次最多可同时配制10块蛋白凝胶

凝胶尺寸:1.0mm Mini-gel(88×68×1mm)

分离范围:10-200kD

触摸屏尺寸:5英寸电容触摸屏,分辨率:800×480

进样器:双进样器,加样精度>95%

混匀器:双磁力搅拌器,混合更均匀

设备清洗:全自动液路清洗系统,试剂避免堵塞管路


PAG-100Auto 全自动蛋白凝胶预制系统

灌制分离胶 → 灌制浓缩胶 →插入梳子

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PAG-100Auto优势


节约时间试剂更少,配比简单,分离胶和浓缩胶可同时配制。最快只需 5 分钟完成制胶,15 分钟即可上样电泳,而电泳时间也仅需30-40 分钟。

更好的重复性PAG-100Auto 配备两个磁力搅拌器和两路自动进样器,分别进行分离胶和浓缩胶的灌入,加样精度和重复性高,避免手动加样误差。

更好的兼容性独有的凝胶缓冲体系使凝胶具有更好的交联率和更均匀的孔径,可完美分离10-200 kDa 蛋白,无需根据分子量大小计算配比,一次配制,基本可满足整个实验室的使用。

高通量

一次可配制 5 块或 10 块凝胶,根据需求选择不同包装的试剂,全部加入即可。多余的凝胶可 4℃ 存放 30 天,随时取用。

更安全

试剂采用低丙烯酰胺系统,配合独有的 APS 引发体系,不但能保证快速有效的成胶,同时极大的预防了有害成份对实验者健康的损害。

性价比更高

相比于预制胶的昂贵,手工制胶的繁琐与耗时;PAG-100Auto 搭配PAG-100Kit制胶试剂盒,批量化制胶(可作为预制胶长时间保存),速度更快,操作更便捷,更具性价比。


2.发光之前的准备

WB-600Auto全自动蛋白印迹处理系统

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WB-600Auto 全自动蛋白印迹处理系统,通过仪器代替繁琐、机械、重复、枯燥的人工实验。高效、快速、自动化地完成 WB 实验中对蛋白膜的封闭、洗膜、孵育等过程。您只需将转印蛋白后的膜放到系统中,准备相应的试剂,并设定程序,剩下的工作将由WB-600Auto 自动完成。多达30 个可独立运行的液体泵,可同时进行最多 6 块膜的处理,每个通道可放置不同规格的样品槽位,且可独立设置程序运行,互不干扰,真正实现高通量。

节约时间

抛开繁琐机械的封闭洗膜孵育过程,原本需要 4个小时 的实验,现在只需5分钟 准备试剂并设置程序,剩下所有的工作将由仪器自动完成。

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节约成本

完全兼容常规试剂,无专用试剂。可设置一抗,甚至封闭液等昂贵试剂的自动回收,且试剂存储位置可实现冷藏,实现重复利用,节约试剂成本。


重复性更好

标准化的操作流程,可大大减少人工操作(如:加样体积、加样精度、孵育时间、孵育次数等)产生的随机误差。


高通量

可进行多达6块膜/胶的同时操作,每个槽位可独立运行,可同时比较6个不同实验条件的结果,如:不同类型的封闭液、抗体浓度、孵育时间、洗涤次数等,大大提高工作效率。也可以同时满足多个实验者同时使用。

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更灵活

可适配4种不同规格的孵育盒,A. 150×88mm、B. 88×88mm、C. (58×88mm、28.5×88mm),兼容不同尺寸的膜/胶。标配即送多达14个孵育盒(A型2个、B型6个、C型6个)


更智能

全触控屏操作,可预设多个实验方案,并且每个步骤的加样体积、孵育时间、清洗次数、振荡时间、振荡幅度均可自主设置。

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3.成像


GelView 6000Plus智能图像工作站

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600万像素冷CCD,环境温度以下55℃透射蓝光模块(470nm,18×15cm)*

五色LED荧光光源(蓝475nm,绿530nm,红620nm,近红外685nm,近红外760nm)*

六孔全自动滤光轮,标配5种滤光片(535nm,600nm,700nm,750nm,830nm)*

分析软件功能强大,可实现蛋白质定量功能双侧落射白光


注:*为全配版配置,简配版可选加装该模块。


模块化设计:


化学发光

双层可调节式载物台,自由切换视野大小(12×10cm,17×14cm)


化学发光+透射蓝光

透射蓝光(470nm),成像面积18×15cm,6位滤光片轮(含600nm滤光片),蓝光防护板


化学发光+透射蓝光+多色荧光

5色LED荧光光源,475nm、 530nm、 620nm、685nm、760nm,6位滤光片轮(含535nm、600nm、 700nm、750nm、830nm滤光片 )


蛋白印迹实验整体解决方案:全自动蛋白凝胶预制、智能操作、无需值守、一键曝光、自动灰度分析,8小时左右可完成。